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Détection acide nucléique de syndrôme respiratoire aigu grave nouveau

July 27, 2021

La détection acide nucléique a les caractéristiques du diagnostic précoce, de la sensibilité élevée et de la spécificité, et est le « étalon or » pour diagnostiquer la nouvelle pneumonie coronaire. Actuellement, la technologie quantitative fluorescente de RT-PCR en temps réel la plus très utilisée. Généralement, les deux cibles situées sur les gènes d'ORF1ab et de N du virus sont détectées. Le même spécimen doit rencontrer le double positif de cible ou l'essai répété comme positif monocible, ou les deux spécimens doivent rencontrer le monocible en même temps pour confirmer le positif de l'acide nucléique du virus SARS-CoV-2.

 

1. Principe de kit acide nucléique de détection ? L'ordre unique de gène du virus est employé comme cible de détection. Par l'amplification d'ACP, l'ordre d'ADN de cible nous choisissons des augmentations exponentiellement. Chaque ordre amplifié d'ADN peut être combiné avec une sonde fluorescent-marquée que nous avons ajoutée à l'avance. , Signal fluorescent de produit, plus de gènes de cible amplifiés, plus le signal fluorescent accumulé est fort. Dans les échantillons sans virus, puisqu'il n'y a aucune amplification de gène de cible, aucune augmentation de signal de fluorescence ne peut être détectée. Par conséquent, la détection acide nucléique est réellement de déterminer s'il y a acide nucléique viral dans l'échantillon en détectant l'accumulation des signaux fluorescents.

 

2. Quels sont les types d'échantillons de essai acides nucléiques ?

Généralement, écouvillons nasaux, écouvillons de gorge, écouvillons nasopharyngaux, crachat, fluide de lavage bronchique, fluide de lavage alvéolaire et ainsi de suite.

 

3. la détection de Cinq-étape la nouvelle procédure de détection de syndrôme respiratoire aigu grave exige cinq étapes : échantillonnage, conservation d'échantillon, stockage, extraction acide nucléique, et essai d'ordinateur. Ceci exige des expériences scientifiques rigoureuses d'accomplir.

1. Essuyez le mur arrière de l'écouvillon pharyngeal et des amygdales pharyngeal bilatérales 5-10 fois chacune avec un écouvillon pharyngeal, et continuez à tourner l'écouvillon ;

2. Le personnel médical est requis de garder l'échantillon, et la tête d'écouvillon est immergée dans la solution de conservation de cellules, et la queue est cassée. Serrez le chapeau de tube immédiatement ;

3. Sauvez, mettez le tube témoin dans un sac scellé et l'envoyer pour l'inspection à temps, et le procédé d'inspection exige un environnement strict de transport, stocké à 2-8 degrés de Celsius.

4. Actionnez l'extraction acide nucléique, extrayez l'acide nucléique à partir de l'échantillon inactivé de virus pour la détection suivante, et utilisez l'équipement automatisé, tel qu'un extracteur acide nucléique.

5. Détection acide nucléique d'ACP de fluorescence, c.-à-d., détection de machine, cela prend 70-80 minutes pour que l'extrait subisse la réaction fluorescente d'amplification d'ACP.

 

4. Quel sont les problèmes avec la détection acide nucléique ?

Le faux négatif, dû à l'échantillonnage inexact, au stockage inexact de spécimen, à l'utilisation de différents types de spécimens, et à l'utilisation des réactifs de différents fabricants peut causer les résultats d'essai acides nucléiques être « faux négatif » et diagnostic manqué ;

Les conditions élevées pour l'équipement ou les plates-formes de détection, de hauts instruments de la sensibilité RT-PCR sont chères, et exigent la propreté élevée et les opérateurs de laboratoire ;

L'essai acide nucléique prend un bon moment, et cela prend habituellement 4-6 heures pour accomplir un essai de RT-PCR. Cependant, considérant le transport témoin, dans le cas d'un grand arriéré des échantillons, les résultats pourront habituellement être rapportés dès que 24 heures. Par conséquent, quand l'essai acide nucléique est négatif, l'addition détection d'IgM et d'IgG d'anticorps peut compenser les points faibles que l'essai acide nucléique est susceptible de causer à diagnostic manqué.